TY  - JOUR
AU  - Ignjatović, Đurđica
AU  - Šukalović, Vladimir B.
AU  - Tasić, Bosiljka
AU  - Kostić-Rajačić, Slađana V.
AU  - Šoškić, Vukić
PY  - 2002
PY  - 2002
UR  - https://radar.ibiss.bg.ac.rs/handle/123456789/18
AB  - In order to find the essential structural motif of the D2L dopamine receptor necessary for the interaction with a-subunit of Gi1 protein, four fragments of the third cytoplasmic loop (CPL3) of this receptor were cloned, expressed in E. coli and purified. After that, fusion proteins with glutathione-S-transferase (GST) were prepared and the interactions quantified by a colorimetric assay for GST activity determination. The presence of D2L-CPL3 fragment-Gia1 complexes was detected by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Kd values for the interaction of the three fragments with Gia1 were similar and in nmol/L range of concentrations, while the peptide representing the insert in the long form of the dopamine D2 receptor expressed about 10-fold lower binding affinity. These results could serve to design new therapeutic agents that might act at the level of receptor/G protein interaction rather than at the level of ligand-receptor binding.
AB  - U cilju pronalaženja bitnih strukturnih motiva potrebnih za interakciju sa a podjedinicom Gi1 proteina klonirana su, eksprimirana i prečišćena 4 fragmenta treće citoplazmatične petlje (CPL3) dopaminskog D2L receptora koji su dalje pripremljeni kao fuzioni proteini sa glutation-S-transferazom (GST). Interakcije su kvantifikovane bojenom reakcijom za određivanje aktivnosti GST. Postojanje kompleksa D2L-CPL3 fragment- Gia1 je dokazano elektroforetskom analizom na SDS-poliakrilamidnom gelu (PAGE). Kd vrednosti za tri fragmenta su bile vrlo slične i u nmol/L opsegu koncentracija, dok je peptid koji predstavlja insert u dugom obliku dopaminskog D2 receptora posedovao oko 10 puta manji afinitet vezivanja za Gia1. Ovi rezultati mogu biti osnova za sintezu novih terapeutskih agenasa koji bi delovali na nivou interakcije receptora i G proteina umesto na nivou vezivanja liganda za receptor.
PB  - Društvo medicinskih biohemičara Srbije i Crne Gore
T2  - Yugoslav Medical Biochemistry
T1  - Interakcija različitih fragmenata treće citoplazmatične petlje dopaminskog d2l receptora čoveka sa a-podjedinicom gi1 proteina - moguća terapeutska primena
T1  - Interaction of different third intracellular loop fragments of human dopamine d2l receptor with a-subunit of gi1 protein - prospective therapeutic application
IS  - 1
VL  - 21
DO  - 10.2298/JMH0201009I
SP  - 9
EP  - 14
UR  - https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_ibiss_18
ER  - 

@article{
author = "Ignjatović, Đurđica and Šukalović, Vladimir B. and Tasić, Bosiljka and Kostić-Rajačić, Slađana V. and Šoškić, Vukić",
year = "2002, 2002",
abstract = "In order to find the essential structural motif of the D2L dopamine receptor necessary for the interaction with a-subunit of Gi1 protein, four fragments of the third cytoplasmic loop (CPL3) of this receptor were cloned, expressed in E. coli and purified. After that, fusion proteins with glutathione-S-transferase (GST) were prepared and the interactions quantified by a colorimetric assay for GST activity determination. The presence of D2L-CPL3 fragment-Gia1 complexes was detected by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Kd values for the interaction of the three fragments with Gia1 were similar and in nmol/L range of concentrations, while the peptide representing the insert in the long form of the dopamine D2 receptor expressed about 10-fold lower binding affinity. These results could serve to design new therapeutic agents that might act at the level of receptor/G protein interaction rather than at the level of ligand-receptor binding., U cilju pronalaženja bitnih strukturnih motiva potrebnih za interakciju sa a podjedinicom Gi1 proteina klonirana su, eksprimirana i prečišćena 4 fragmenta treće citoplazmatične petlje (CPL3) dopaminskog D2L receptora koji su dalje pripremljeni kao fuzioni proteini sa glutation-S-transferazom (GST). Interakcije su kvantifikovane bojenom reakcijom za određivanje aktivnosti GST. Postojanje kompleksa D2L-CPL3 fragment- Gia1 je dokazano elektroforetskom analizom na SDS-poliakrilamidnom gelu (PAGE). Kd vrednosti za tri fragmenta su bile vrlo slične i u nmol/L opsegu koncentracija, dok je peptid koji predstavlja insert u dugom obliku dopaminskog D2 receptora posedovao oko 10 puta manji afinitet vezivanja za Gia1. Ovi rezultati mogu biti osnova za sintezu novih terapeutskih agenasa koji bi delovali na nivou interakcije receptora i G proteina umesto na nivou vezivanja liganda za receptor.",
publisher = "Društvo medicinskih biohemičara Srbije i Crne Gore",
journal = "Yugoslav Medical Biochemistry",
title = "Interakcija različitih fragmenata treće citoplazmatične petlje dopaminskog d2l receptora čoveka sa a-podjedinicom gi1 proteina - moguća terapeutska primena, Interaction of different third intracellular loop fragments of human dopamine d2l receptor with a-subunit of gi1 protein - prospective therapeutic application",
number = "1",
volume = "21",
doi = "10.2298/JMH0201009I",
pages = "9-14",
url = "https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_ibiss_18"
}

Ignjatović, Đ., Šukalović, V. B., Tasić, B., Kostić-Rajačić, S. V.,& Šoškić, V.. (2002). Interakcija različitih fragmenata treće citoplazmatične petlje dopaminskog d2l receptora čoveka sa a-podjedinicom gi1 proteina - moguća terapeutska primena. in Yugoslav Medical Biochemistry
Društvo medicinskih biohemičara Srbije i Crne Gore., 21(1), 9-14.
https://doi.org/10.2298/JMH0201009I
https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_ibiss_18

Ignjatović Đ, Šukalović VB, Tasić B, Kostić-Rajačić SV, Šoškić V. Interakcija različitih fragmenata treće citoplazmatične petlje dopaminskog d2l receptora čoveka sa a-podjedinicom gi1 proteina - moguća terapeutska primena. in Yugoslav Medical Biochemistry. 2002;21(1):9-14.
doi:10.2298/JMH0201009I
https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_ibiss_18 .

Ignjatović, Đurđica, Šukalović, Vladimir B., Tasić, Bosiljka, Kostić-Rajačić, Slađana V., Šoškić, Vukić, "Interakcija različitih fragmenata treće citoplazmatične petlje dopaminskog d2l receptora čoveka sa a-podjedinicom gi1 proteina - moguća terapeutska primena" in Yugoslav Medical Biochemistry, 21, no. 1 (2002):9-14,
https://doi.org/10.2298/JMH0201009I .,
https://hdl.handle.net/21.15107/rcub_ibiss_18 .