Strukturne i funkcionalne promene paraštitastih žlezda i bubrega nekon primene steroida, izoflavona i kalcijuma u animalnom modelu andropauze
Structural and functional changes of parathyroid glands and kidneys after treatment with steroids, isoflavones and calcium in an animal model of the andropause
2013
Аутори:
Živanović, Jasmina B.Остала ауторства
Filipović, BrankoČakić-Milošević, Maja
Milošević, Verica
Šošić-Jurjević, Branka
Ajdžanović, Vladimir
Тип документа:
Докторска теза (Објављена верзија)
Метаподаци
Приказ свих података о документуАпстракт:
Postepeno smanjenje koncentracije testosterona u cirkulaciji tokom procesa starenja,
koje je u čvrstoj vezi sa povećanom učestalošću nastanka kardiovaskularnih oboljenja,
benignih i malignih oboljenja prostate i osteoporoze, označava se kao andropauza.
Terapije steroidnim hormonima, kao i konvencionalna terapija Vit D i kalcijumom, koje
se primenjuju u prevenciji i tretmanu menopauzalnih i andropauzalnih simptoma kod
oba pola, ispoljavaju i neželjena dejstava i povećavaju rizik od nastanka
kardiovaskulanih oboljenja, hiperfosfaturije, hipertrofije prostate benignog karaktera,
kancera dojke i prostate. Zbog brojnih negativnih efekata primenjivanih terapija, u
poslednje vreme sve je veći broj istraživanja koja teže pronalaženju rešenja sa ciljem
prevazilaženja navedenih problema. Veliku pažnju privlače izoflavoni soje, genistein i
daidzein, koji su predmet istraživanja brojnih studija, prvenstveno zbog svog
blagotvornog efekta na simptome starenja kod oba pola.
Cilj ovog istraživanja bio je rasvetljavanje dejstava steroida, izoflavona i kalcijuma na
ključne regulatore homeostaze Ca2+ i Pi u animalnom modelu andropauze, i utvrđivanje
njihovog potencijalnog efekta u očuvanju metabolizma minerala koji je narušen tokom
procesa starenja.
Mužjaci pacova Wistar soja, starosti 15 meseci, su orhidektomisani (Orx) i lažno
operisani (SO) u ketaminskoj anestaziji (15 mg/kg b.w.). Dve nedelje nakon operacije
Orx životinje su podeljene u eksperimentalne grupe (n=8), kojima su subkutano
aplikovani testosteron-propionat (5mg/kg t.m.; TP), estradiol-dipropionat (0.625 mg/kg
t.m.; EDP), vitamin D (50 μg/kg t.m.; Vit D), genistein (30 mg/kg t.m.; G), daidzein (30
mg/kg t.m.; D) i intramuskularno kalcijum (28.55 mg/kg t.m.; Ca), svakog dana tokom
3 nedelje. Svaka tretirana grupa je imala svoje kontrolne SO i Orx grupe za poređenje,
kojima je aplikovan odgovarajući volumen adekvatnog rastvarača. Tokom izvođenja
eksperimenta, životinjama su bile slobodno dostupne voda i laboratorijska hrana, koja
nije sadržala sastojke soje ni leguminoza, sa kazeinom kao izvorom proteina. Životinje
su dekapitovane 24h nakon poslednjeg tretmana, paraštitaste žlezde i levi bubrezi su
izolovani, izmereni i pripremljeni za tehnike svetlosne i elektronske mikroskopije, dok
su desni bubrezi zamzrnuti u tečnom azotu i čuvani na -80˚C do korišćenja i izolacije
RNK. Analiza tkiva je izvršena korišćenjem svetlosne mikroskopije, tehnike
imunohistohemijskog bojenja i metoda stereološke analize, te transmisione elektronske
mikroskopije, a ekspresija gena je određena reakcijom lančanog umnožavanja u
realnom vremenu. Biohemijskim metodama određene su koncentracije PTH, Ca2+, Pi i
kreatinina u serumu, kao i koncentracije Ca2+, Pi i kreatinina u urinu. Dobijeni podaci su
statistički obrađeni.
Volumen paraštitastih žlezda značajno je povećan kod Orx pacova u odnosu na SO
grupu. Kod Orx životinja tretiranih TP-om, EDP-om ili Vit D volumen paraštitastih
žlezda je značajno smanjen u poređenju sa Orx pacovima. Volumenska gustina glavnih
ćelija je značajno smanjena, dok je volumenska gustina intersticijuma značajno
povećana nakon tretmana EDP-om u odnosu na Orx grupu životinja. Tretman
genisteinom je uzrokovao značajno povećanje volumena paraštitastih žlezda, dok je
tretman daidzeinom značajno smanjio volumen paraštitastih žlezda, u poređenju sa
istom vrednošću kod Orx pacova. Tretmani genisteinom ili daidzeinom su statistički
značajno smanjili volumensku gustinu glavnih ćelija, u poređenju sa Orx grupom
životinja. Nakon tretmana genisteinom i daidzeinom, volumenska gustina intersticijuma
je značajno povećana u odnosu na Orx grupu životinja. Kod životinja tretiranih
kalcijumom, volumen paraštitastih žlezda je značajno smanjen, dok je volumenska
gustina intersticijuma značajno povećana, u poređenju sa Orx pacovima. Kod Orx
životinja nivo PTH u serumu je značajno povećan u odnosu na SO grupu, dok je nivo
PTH nakon tretmana TP-om, EDP-om, Vit D, izoflavonima ili kalcijumom značajno
smanjen u poređenju sa Orx životinjama. Intezitet NaPi 2a signala je redukovan kod
Orx životinja, u odnosu na SO grupu. Tretmani TP-om, Vit D, genisteinom ili
daidzeinom su značajno povećali nivo ekspresije iRNK za NaPi 2a i jačinu
imunofluorescentnog signala za NaPi 2a na apikalnoj membrani ćelija proksimalnih
tubula, u poređenju sa Orx grupom. Tretman EDP-om je značajno smanjio nivo iRNK
za NaPi 2a, kao i prisustvo kotransportera na apikalnoj membrani ćelija proksimalnih
tubula, u odnosu na Orx pacove. Jačina imunofluorescentnog signala za PTH1R je
povećana nakon Orx, u poređenju sa SO grupom. Nakon tretmana EDP-om signal za
PTH1R je neznato promenjen u odnosu na Orx životinje, dok su tretmani TP-om, Vit D,
genisteinom, daidzeinom ili kalcijumom značajno smanjili jačinu imunofluorescentnog
signala za PTH1R, u odnosu na Orx životinje. Ekspresija FGFR i Klotho receptora nije
značajno promenjena kod Orx grupe u poređenju sa SO pacovima. Tretman EDP-om je
značajno povećao nivo ekspresije FGFR i Klotho receptora u odnosu na Orx kontrolnu
grupu. Tretmani genisteinom ili daidzeinom su značajno smanjili ekspresiju FGFR, dok
je ekspresija Klotho receptora povećana nakon genisteina, odnosno smanjena nakon
daidzeinskog tretmana, u poređenju sa Orx životinjama. Koncentracije Ca2+ i Pi u
serumu su značajno smanjenjene nakon Orx, dok su koncentracije Ca2+ i Pi u urinu
povećane, u poređenju sa SO kontrolnom grupom životinja. Nakon tretmana TP-om,
EDP-om, Vit D, genisteinom, daidzeinom ili kalcijumom koncentracije Ca2+ u serumu
su povećane u odnosu na isti parametar kod Orx pacova. Koncentracija Pi u serumu je
povećana nakon tretmana TP-om, genisteinom, daidzeinom i kalcijumom, u poređenju
sa Orx kontrolom. Aplikovanje TP, EDP, Vit D, genisteina, daidzeina ili kalcijuma je
uzrokovalo snižavanje koncentracije Ca2+ u urinu, u odnosu na Orx životinje. Tretmani
Vit D, genisteinom, daidzeinom ili kacijumom su snizili koncentraciju Pi u urinu, dok je
tretman EDP-om povećao koncentraciju Pi u urinu, u poređenju sa Orx grupom.
Dobijeni rezultati pokazuju da tretmani andropauzalnih mužjaka pacova steroidima,
izoflavonima i kalcijumom ispoljavaju izvesne razlike u jačini istosmernih efekata na
ključne regulatore homeostaze Ca2+ i Pi, kod orhidektomisanih mužjaka pacova
srednjeg životnog doba. Naime, tretmani izoflavonima ispoljavaju jači stimulatoran
efekat na ekspresiju NaPi 2a kotransportera, intenzivnije snižavaju stepen zastupljenosti
PTH1R, prisustvo i ekspresija FGFR u tubulima bubrega su izraženije redukovani, a
promene u smanjenju koncentracija Ca2+ i Pi u urinu, odnosno povećanju koncentracija
Ca2+ i Pi u serumu su više izražene, u poređenju sa blažim efektima tretmana steroidnim
hormonima i kalcijumom. Navedene promene mogu ponovno uspostaviti homeostazu
narušenu procesom starenja.
Кључне речи:
Andropauza; Steroidi; Izoflavoni; Kalcijum; Paraštitastežlezde; NaPi 2a; PTH1R; FGFR; Klotho receptorИзвор:
University of Belgrade, Faculty of Biology, 2013, 1-116Финансирање / пројекти:
- Одговор неуроендокриног система пацова на одабране биљне екстракте, фитоестрогене, стероидне и пептидне хормоне (RS-MESTD-Basic Research (BR or ON)-173009)
URI
http://eteze.bg.ac.rs/application/showtheses?thesesId=805https://fedorabg.bg.ac.rs/fedora/get/o:7136/bdef:Content/download
http://vbs.rs/scripts/cobiss?command=DISPLAY&base=70036&RID=44659727
http://nardus.mpn.gov.rs/123456789/2116
https://radar.ibiss.bg.ac.rs/handle/123456789/2433