Биосинтеза гвајанолида код цикорије (Cichorium intybus L.) - утицај трансформације на продукцију и испитивање активности гермакрен А-синтазе и -оксидазе коришћењем промоторских фузија и утишавања гена
Guaianolide biosynthesis in chicory (Cichorium intybus L.) - influence of transformation on the production and study of germacrene A synthase and oxidase activity using promoter fusions and gene silencing
Аутори:
Bogdanović, MilicaОстала ауторства
Simonović, AnaSubotić, Angelina
Todorović, Slađana
Cvetić-Antić, Tijana
Janošević, Dušica
Тип документа:
Докторска теза (Објављена верзија)
Метаподаци
Приказ свих података о документуАпстракт:
Цикорија (Cichorium intybus L.) је традиционално коришћена лековита биљка богата гвајанолидима - биоактивним сесквитерпенским лактонима. У овом истраживању цикорија је трансформисана уз помоћ Agrobacterium rhizogenes, ради евалуације продукције гвајанолида у трансгеним културама коренова и регенерисаним биљкама, и испитивања утицаја флоралне транзиције и експресије бактеријских онкогена на акумулацију ових једињења. A. rhizogenes сој A4M70GUS je успешно трансформисао цикорију, дајући HR културе из којих спонтано регенеришу изданци, а регенеранти цветају in vitro. Код регенерисаних трансгених биљака, гвајанолиди се акумулирају у току флоралне транзиције, што није случај у нетрансформисаним биљкама. Акумулација ових једињења била је посебно изражена у корену трансформаната, што је корелисало са повишеном експресијом RolC гена.
Гвајанолиди потичу од заједничког прекурсора - гермакрена А, који настаје дејством гермакрен А синтазе (GAS). У следећем кораку биосинтезе, гермакрен А оксидаза (GAO) у неколико корака преводи гермакрен А до гермакрен А киселине, од које настаје костунолид - прекурсор осталих сесквитерпенских лактона. GAS РНК цикорије је претходно изолована у краћој и дужој форми - CiGASlo (GAS long) и CiGASsh (GAS short). Из BAC библиотеке цикорије је изолован један промотор за GAS long, два промотора за GAS short и један за GAO, који су фузионисани са флуоресцентним репортером GFP. Функционалност и јачина промотора је праћена агроинфилтрацијом на зеленој салати и стабилном котрансформацијом цикорије A4M70GUS сојем са унетим конструктима. Као репортер за котрансформацију је коришћен други флуоресцентни маркер, DsRED. Услед инкомпатибилности коришћених флуоресцентних репортера DsRED и GFP, активност промотора у регенерисаним трансгеним биљкама је детектована RT-PCR и qRT-PCR техникама. Промотори су се одликовали различитом јачином и делимичном ткивном специфичношћу...
Кључне речи:
Cichorium intybus; Гвајанолиди; Гермакрен А синтаза; Гермакрен А оксидаза; Agrobacterium rhizogenes; Промоторске фузије; РНК интерференца; DsRED; GFP; Сесквитерпенски лактониИзвор:
University of Belgrade, Faculty of Biology, 2015, 1-261Финансирање / пројекти:
- Физиолошка, хемијска и молекуларна анализа диверзитета одабраних ретких и угрожених биљних врста у циљу еx ситу заштите и продукције биолошки активних једињења (RS-MESTD-Basic Research (BR or ON)-173024)
URI
http://eteze.bg.ac.rs/application/showtheses?thesesId=2913https://fedorabg.bg.ac.rs/fedora/get/o:11129/bdef:Content/download
http://vbs.rs/scripts/cobiss?command=DISPLAY&base=70036&RID=1024923058
http://nardus.mpn.gov.rs/123456789/5444
https://radar.ibiss.bg.ac.rs/handle/123456789/2589