Nivo ekspresije gena za protorakocikotropne hormone kod larvi Morimus funereus iz prirodnih populacija

Abstract

Protorakocikotropni hormoni (PTTHs) pripadaju morfogenetskim hor­monima kod insekata. PTTH pod uticajem spoljašnjih i/ili unutrašnjih fak­tora stimulisu protorakalnu žlezdu na sintezu i oslobađanje ekdizona. Cilj ovog rada je bio da primenom PCR tehnike identifikujemo nivo ekspresije gena za PTTHs kod larvi Morimus funereus iz prirodnih popu­lacija poreklom sa Fruške Gore. Uzeta je sekvenca za PTTHs gen (Kawakami et al, 1990) i konstrnisano je 7 prajmera koji su u kombinaciji uzvodnih i nizvodnih prajmera dali 14 kombinacija za testiranje. Iz cerebralnih kompleksa M. funereus izolovana je totalna RNK, koja je potom prevedena u cDNK templat reakcijom reverzne transkripcije. Dobijena cDNK je služila kao templat u procesu in vitro amplifikacije DNK zajedno sa različitim kombinacijama uzvodnih i nizvodnih prajmera. Kao interna kontrola korišćena ie rRNK inskata (Salazar et al., 1993). Rezultati su pokazalr da 7 parova novih prajmera amplifikuje DNK razlicitih molekulskih težina (270 do 400 baznih parova). Specificnost amplifikacije utvrdivana je hibridizacijom PCR produkata sa specificnorn probom za PTTH iRNK (Southern blot hibridizacija). Od potencijalnih kan­didata odabrani su parovi prajrnera koji specificno hibridizuju sa probom za iRNK PTTH gena.