Principi NAT tehnologije sa osvrtom na rezultate Instituta za transfuziologiju VMA u periodu od 2007. do 2011. godine

Abstract

Nucleic-acid Amplification Testing (NAT) consist of extraction, amplification, hybridization and detection. Polymerase Chain Reaction (PCR) is method for amplification of viral genetic material (DNA/RNA) in enough number of copies, so we can detect them. Since year 1943, when transmission of hepatitis via transfusion was reported till beginning of 21st century, when NAT was implemented, large number of tests for detection of hepatitis B and C virus (HBV, HCV) and human immunodeficiency virus (HIV) were developed. In this article, we describe basic princples of detection of these viruses by NAT. We also show results from testing samples of blood donors in Institute of Transfusiology from April 2007 till June 2011. From 50 369 donors testing in Mini Pools (MP) of 24, we found two HCV RNA positive samples, one HBV DNA positive sample and all pools were HIV RNA negative. From 2 689 samples which were testing by Individual Donation (ID) NAT, 135 were HBV DNA positive, 108 were HCV RNA positive and 7 were HIV RNA positive. All samples also were tested by Enzyme Link Immunosorbent Assay (ELISA) and Confirmatory tests. Comparison of our results show validity of NAT testing, especially when ELISA tests of less specificity and sensitivity were used.

Da bi testiranje nukleinskih kiselina bilo moguće, neophodno je izdvojiti ih iz virusa (ekstrakcija), zatim umnožiti (amplifikacija), obeležiti specifičnim probama (hibridizacija) i detektovati. To se obavlja korišćenjem metode 'Polymerase Chain Reaction' (PCR) ili lančane reakcije polimeraze koja nam omogućava da umnožimo deo virusnog genoma do količine koju je moguće detektovati. Od 1943. godine, kada je transmisija hepatitisa preko transfuzije prvi put prijavljena, do početka 21. veka, kada je masovno uvedena NAT tehnologija (eng. Nucleic-acid Amplification Testing - testiranje amplifikovanih nukleinskih kiselina), došlo je do značajnog poboljšanja u otkrivanju virusa uzročnika hematogenih transmisivnih bolesti. U ovom radu dati su osnovni principi NAT-a, odnosno detekcije genetskog materijala virusa uzročnika hepatitisa tipa B, C i virusa humane imunodeficijencije (HIV-a). Takođe, opisani su NAT rezultati dobijeni kod uzoraka krvi davalaca u Institutu za transfuziologiju VMA u periodu od aprila 2007. do juna 2011. godine. Od 50.369 testiranih davalaca u pulu, detektovana su dva HCV RNK pozitivna uzorka, jedan HBV DNK pozitivan uzorak, a za HIV RNK svi pulovi su bili negativni. Od 2.689 pojedinačno obavljenih NAT testiranja, najviše pozitivnih bilo je za HBV DNK (135 uzoraka), zatim za HCV RNK (108 pozitivnih) i 7 pozitivnih za HIV RNK. Za sve navedene uzorke paralelno su rađeni određeni enzimoimunski i potvrdni testovi. Komparacija rezultata primenjenih testova na našim ispitanim uzorcima potvrdila je opravdanost primene NAT-a, posebno prilikom korišćenja manje specifičnih i osetljivih enzimoimunskih testova.