Привремена експресија бета-глукозидаза кичице у листовима дувана
Privremena ekspresija beta-glukozidaza kičice u listovima duvana
2022
Autori:
Todorović, MilošMilutinović, Milica
Božunović, Jelena
Banjanac, Tijana
Petrović, Luka
Mišić, Danijela
Ostala autorstva
Živić, MiroslavPetković, Branka
Tip dokumenta:
Konferencijski prilog (Objavljena verzija)
,
© 2022 by the Serbian Biological Society
Metapodaci
Prikaz svih podataka o dokumentuApstrakt:
Ензими бета-глукозидазе су изразито хетерогена група хидролитичких ензима, са заједничком особином хидролизе глукозидних веза β-D-глукозида и олигосахарида. Испитивањем гена укључених у метаболички пут секоиридоидних глукозида кичице (Centaurium erythrea Rafn), установљено је присуство два гена кандидата за бета-глукозидазу (CeBGLU1 и CeBGLU2). У овом раду је развијен протокол за клонирање гена бета-глукозидаза из кичице у pJL-TRBO вектор употребом PCR методе и рестрикционим клонирањем. Успешност клонирања у pJL-TRBO вектор, као и успешност генетичке трансформације ћелија Agrobacterium tumefaciens GV3101 методом електропорације, је проверена техником PCR на бактеријским колонијама, и додатно потврђена секвенцирањем.
Ензими бета-глукозидазе су под контролом CaMV35S промотора експримирани у Nicotiana benthamiana методом агроинфилтрације. Хидролитичка функција ензима је потврђена ензиматским in vitro тестовима, са 4-нитрофенил-β-D-глукопиранозидом (pNPG) као комерцијалним супстратом. У реакцији са оба ензима дошло је до ослобађања жуте хромофоре 4-нитрофенола (pNP). Забележена је статистички значајна разлика током реакције протеина CeBGLU1 са pNPG, где је настало око 260 % више продуката него у реакцији супстрата са CeBGLU2. Потврда функције ензима in planta даје могућност спровођења додатних истраживања у циљу разумевања молекуларних механизама одговорних за експресију и регулацију активности испитиваних ензима.
Finansiranje / projekti:
- Ministarstvo nauke, tehnološkog razvoja i inovacija Republike Srbije, institucionalno finansiranje - 200007 (Univerzitet u Beogradu, Institut za biološka istraživanja 'Siniša Stanković') (RS-MESTD-inst-2020-200007)
U:
- Živić M, Petković B, editors. Knjiga sažetaka: Treći Kongres biologa Srbije: Osnovna i primenjena istraživanja: Metodika nastave; 2022 Sep 21-25; Zlatibor, Serbia. Belgrade: Serbian Biological Society; 2022. p. 74.