Uloga autofagije u neurotoksičnom delovanju vanćelijskog alfa sinukleina na SH-SY5Y ćelije humanog neuroblastoma
The role of autophagy in neurotoxicity caused by extracellular ASYN
2016
Преузимање 🢃
Аутори:
Đuranović, AndrijaJeremić, Marija
Zogović, Nevena
Tovilović-Kovačević, Gordana
Dulović, Marija
Тип документа:
Чланак у часопису (Објављена верзија)
Метаподаци
Приказ свих података о документуАпстракт:
Uvod. U osnovi patogenetskog mehanizma Parkinsonove bolesti leži povećano nakupljanje proteina α-sinukleina (ASYN) u dopaminergičkim neuronima substantiae nigrae, što, između ostalog, dovodi i do smrti ćelija. Iako je ranije smatran isključivo unutarćelijskim proteinom, novijim istraživanjima je pokazano da se ASYN nakuplja i u vanćelijskom prostoru. Do nakupljanja ASYN može da dođe usled oštećenja sistema za razgradnju proteina, od kojih je najznačajniji mehanizam autofagija. Autofagija je regulisana proizvodima ATG gena (engl. autophagy-related genes). Jedan od njih, ATG7, ima bitnu ulogu u formiranju i sazrevanju autofagozoma. Cilj. Cilj ovog rada je bio da se ispita uloga autofagije u neurotoksičnosti vanćelijskog ASYN na SH-SY5Y ćelije humanog neuroblastoma, diferentovanih u neuronski fenotip. Materijali i metode. Svi eksperimenti su rađeni na SH-SY5Y ćelijskoj liniji humanog neuroblastoma. Ćelije su diferentovane 'all-trans' retinoičnom kiselinom i tretirane medijumom koji sadrži vanćelijski ASYN. Imunoblot metodom je potvrđeno prisustvo vanćelijskog ASYN i praćena promena eskpresije markera autofagije, proteina LC3-II i beklin-1. Metodom transfekcije sa malom interferirajućom RNK inhibirana je ekspresija ATG7 proteina. Vijabilitet i broj ćelija određeni su kristal violet testom. Rezultati. Vanćelijski ASYN dovodi do značajnog smanjenja vijabiliteta SH-SY5Y ćelija, što je praćeno povećanjem nivoa markera autofagije, proteina LC3-II i beklin-1. Analizom ćelijskog vijabiliteta primećen je značajan pad u broju živih ćelija kod kojih je utišan gen za ATG7, a koje su gajene u prisustvu vanćelijskog ASYN. Zaključak. Vanćelijski ASYN dovodi do smanjenog preživljavanja SH-SY5Y ćelija diferentovanih u neuronski fenotip, što je praćeno indukcijom autofagije. Inhibicija autofagije preko utišavanja ATG7 gena dovela je do povećane osetljivosti ćelija gajenih u prisustvu vanćelijskog ASYN, što ukazuje na moguću protektivnu ulogu autofagije u neurotoksičnosti, izazvanoj nagomilavanjem ASYN u vanćelijskom prostoru.